Biblioteca CICESE

28091

Ramírez Torrez, José Alberto

Muchos protocolos para la criopreservación de ovocitos necesitan ser optimizados debido a su complejidad celular. Para ello, entender el daño producido por la criopreservación en los ovocitos es de suma importancia. El objetivo de este trabajo fue determinar el efecto de la criopreservación en la actividad de la proteína MAPK, la evaluación de los microtúbulos y el estado de los cromosomas en ovocitos de ostión del Pacífico, Crassostrea gigas, y del abulón rojo, Haliotis rufescens, criopreservados bajo diferentes condiciones. Ovocitos de ostión fueron obtenidos directamente de la gónada y, previa selección del mejor crioprotector, se suspendieron alícuotas en etilen glicol (EG) 10%, sacarosa (S) 0.25M y la mezcla EG10% y S 0.25M para ser congeladas en popotes franceses (0.25 mL) de acuerdo a las especificaciones de Tervit et al. 2005. Para los experimentos con abulón, las hembras fueron desovadas. Los ovocitos fueron incubados en trehalosa (T) 0.2M o 0.4M por 20 min antes de ser colocados en popotes franceses de 0.25 mL y congelados con una tasa de congelación de tres pasos. El primer paso consistió en bajar la temperatura a 2°C/min hasta alcanzar los -8°C, inducir una nucleación por 10 min, continuar bajando la temperatura a 0.3°C/min hasta alcanzar los -30°C y terminar bajando la temperatura a 50°C/min hasta llegar a los -150°C. Los ovocitos de ambas especies fueron almacenados a -196°C. Para evaluar el daño debido a la criopreservación, muestras de cada especie y de los diferentes tratamientos fueron descongelados y alícuotas fueron preparadas para evaluar: la viabilidad por medio de una tinción fluorescente con FDA, el daño en los microtúbulos mediante inmunocitoquímica, condensación de cromosomas detectado por tinción fluorescente con DAPI, la actividad de la proteína MAPK utilizando la técnica de Western blot y la capacidad de los ovocitos descongelados para ser fertilizados. Los resultados indicaron que no hubo diferencias significativas (P > 0.05) en la viabilidad o la producción de larvas trocóforas de los ovocitos de ostión congelados en EG10% o la mezcla. El mayor porcentaje de husos no organizados (100%) fue encontrado en las muestras congeladas en S0.25M y la mezcla EG10% y S0.25M. Se encontraron diferencias significativas (P < 0.001) en la descondensación de los cromosomas. Comparado con el control, todos los tratamientos tuvieron < 26% de ovocitos no condensados. La actividad de la proteína MAPK no fue afectada por el proceso de criopreservación. En el caso de la incubación de los ovocitos de abulón en los diferentes tratamientos, se encontró que los mejores tratamientos para los ovocitos incubados fueron por 20 min en 0.2M de trehalosa (96 ± 1% de viabilidad) y para los ovocitos incubados por 10 min en 0.4 M de trehalosa (98 ± 1% de viabilidad). Los ovocitos descongelados de abulón no fueron viables. Este trabajo demostró que se pueden obtener larvas trocóforas de ostión viables y que el criodaño a nivel celular fue evitado. Sin embargo, más investigación es necesaria para la criopreservación de ovocitos de abulón rojo ya que se demostró un criodaño físico a nivel de membrana y ultraestructura. 

Tesis para obtener el grado de Maestro en Ciencias en Acuicultura

Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada

2011

xi, 68 hojas : ilustraciones

Paniagua Chávez Carmen Guadalupe; Portillo López Amelia; Del Río Portilla Miguel Angel; Fernández Zepeda José Alberto

Crassostrea gigas
Haliotis rufescens
Criopreservación
Ovocitos
MAPK
Huso mitótico
Cromosoma
Moluscos
Ciencias del mar

Miembros del Comité: Paniagua Chávez Carmen Guadalupe; Portillo López Amelia; Del Río Portilla Miguel Angel; Fernández Zepeda José Alberto
Incluye referencias bibliográficas

Número de inventario	Volumen	Biblioteca	Ubicación	Estado	Nota
28091	--	CICESE	Colección de tesis	Disponible

Ramírez Torrez, J. A. 2011.Actividad de la MAPK, organización del huso mitótico y condensación de los cromosomas en ovocitos de moluscos después de la criopreservación. Tesis de Maestría en Ciencias. Centro de Investigación Científica y de Educación Superior de Ensenada, Baja California. xi, 68 hojas.